蛋白质印迹法

western blotting

定义：总蛋白进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，后将蛋白质转至尼龙膜，用特定蛋白质抗体进行免疫反应，显色后可显示该特定蛋白的存在与表达量。用来检测在不均一的蛋白质样品中是否存在目标蛋白的一种方法。

学科：细胞生物学_细胞生物学技术

相关名词：聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫反应 抗原抗体复合物

图片来源：视觉中国

【延伸阅读】

蛋白质印迹法也称免疫印迹法，是一种常用的蛋白质检测方法，它通过电泳将目标蛋白从复杂的样品中分离出来，然后将特异性抗体与待测蛋白结合，最后利用免疫染色技术将目标蛋白可视化地显示在固相载体上并进行定量分析。

蛋白质印迹法通常包括以下步骤：

1.提取总蛋白质：首先需要从组织、细胞或体液等生物样本中提取总蛋白质。在这个过程中需要注意避免蛋白质的降解和失活。

2.分离蛋白质：将提取的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳后不同相对分子质量的蛋白质被分离。不同的蛋白质需要不同的电泳条件（电压、电流、时间等参数）才能得到最佳分离效果。

3.转移蛋白质：将分离后的蛋白质转移到硝酸纤维素膜或其他固相载体上，使蛋白质表面化，以便与特异性抗体相结合。需要控制电转移时间和转移缓冲液的浓度等，以确保蛋白质能够被充分转移并保持活性。

4.免疫反应：目标蛋白作为抗原与相应的第一抗体特异性结合，酶或同位素标记的第二抗体再与第一抗体特异性结合，形成抗原抗体复合物。

5.检测：使用适当的标记物（如荧光染料、化学发光剂等）对抗原抗体复合物进行检测，从而确定目标蛋白的存在及相对浓度。

6.结果分析：对免疫印迹法的结果进行定量分析和比较，以确定目标蛋白的相对浓度及表达情况。进行结果分析时需要注意结果的可靠性和重复性。

蛋白质印迹法具有灵敏度高、特异性高和可定量等优点，被广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。

（延伸阅读作者：西华师范大学生态研究院 杨炜蓉博士）

责任编辑：张鹏辉